慢病毒介导的RhoGDI2/Endostatin基因小鼠膀胱癌动物模型的建立

登记号：201696223　　　　分类号： R737.14;R737.14

主要完成单位： 广西壮族自治区肿瘤防治研究所

主要完成人员：唐勇、白先忠、王琪、梁霞、蒙清贵、陆浩源、于勇、李秀宁、高超

任务来源：广西壮族自治区科学技术厅　　　　推荐部门：广西壮族自治区卫生和计划生育委员会

登记日期：2016年3月22日

膀胱癌是我国泌尿外科最常见的恶性肿瘤，非肌层浸润性膀胱癌约70%的患者将在3年内复发。而肌层浸润性膀胱癌早期症状少，进展快，预后差，约50%局限进展期的患者肿瘤将出现远处转移，膀胱转移癌的化疗效果欠佳，目前尚缺乏特异性的靶向治疗药物。因此，了解膀胱癌局部复发及远处转移的机制，提高患者总的生存率有着重要的意义。膀胱癌的转移是个复杂，多步骤的过程，其中一重要的机制就是转移抑制基因的失活。RhoGDI2 (rho GDP dissociation inhibitor 2)基因是一个转移抑制基因，属于RhoGDI蛋白家族成员。课题组研究了RhoGDI2在人体膀胱癌组织中的表达情况及意义，并利用生物信息学方法探讨RhoGDI2抑制膀胱癌转移的作用机制、传导通路。再利用慢病毒载体系统，将RhoGDI2基因导入膀胱癌T24细胞系中过表达，构建了RhoGDI2基因过表达的T24细胞裸鼠皮下成瘤模型。

结果用免疫组化的方法对44例膀胱癌组织中RhoGDI2基因表达情况进行了分析，非肌层浸润型和肌层浸润型膀胱癌组织均可见RhoGDI2阳性表达，主要表达于尿路上皮癌肿瘤细胞，癌组织成片阳性表达。在癌组织、癌旁组织或者正常组织的血管内皮、管壁见阳性或者强阳性表达，在血细胞（包括红细胞、淋巴细胞等）表达水平较高，巨核细胞也见阳性。膀胱癌组织中阳性表达主要见于细胞质，偶尔见于细胞核。非肌层浸润型膀胱癌RhoGDI2基因的表达比肌层浸润型膀胱癌高（P＜0.05＝，高级别尿路上皮癌中RhoGDI2基因的表达比肌层浸润型膀胱癌低（P＜0.05＝，原发膀胱癌中RhoGDI2基因的表达较复发性膀胱癌高（P＜0.05＝，有转移的膀胱癌中RhoGDI2基因的表达较非转移组低（P＜0.05＝，膀胱癌组织中RhoGDI2的表达与性别、年龄无关，与分期、分化呈负相关，复发与转移组织标本RhoGDI2的表达降低。RhoGDI2抑制膀胱癌的浸润、转移，可能是膀胱癌转移抑制因子。构建并优化了慢病毒生产的流程，使得慢病毒生产的滴度提高了近100倍，能高效的将RhoGDI2基因转染人膀胱癌T24细胞系，并持续高表达，T24/RhoGDI2可在裸鼠体内成瘤，过表达RhoGDI2基因后，T24细胞在裸鼠体内成瘤能力下降。进一步证实了RhoGDI2基因是膀胱癌转移抑制基因。从NCBI的从GEO datasets数据库搜索膀胱癌转移相关的患者组织全基因组表达谱芯片数据，利用GEO2R、PATHER、DAVID工具筛选相关基因及通路，在首先发现了RhoGDI2可能通过RhoA—ROCK—MLC，Ras—Raf—MEK—AP1信号通路调节肌丝蛋白和细胞骨架，以及细胞的增殖、分化等抑制膀胱癌转移。

课题组通过本研究从动物模型至人体组织标本进一步证实了RhoGDI2基因是膀胱癌的转移抑制因子，并且在率先探讨了RhoGDI2基因在不同分化类型膀胱癌，不同分期、不同预后膀胱癌之间表达的情况，首先发现了RhoGDI2基因可能抑制膀胱癌转移的两条通路。为进一步研究RhoGDI2基因是如何抑制膀胱癌转移提供了新的思路，对利用RhoGDI2基因作为膀胱癌靶向治疗分子做了初步的研究。

本课题培养研究生2名，2篇论文获2015全国泌尿男生殖系统肿瘤专题会议收录，发表SCI论文1篇，中文核心期刊论文1篇，科技核心期刊论文1篇，其他期刊论文3篇。本课题子课题获得广西硕士研究生科研创新项目1项资助。